[{"data":1,"prerenderedAt":-1},["ShallowReactive",2],{"dispatch-exceptions":3,"glossary-ligation-chimique-native":6},{"skip":4,"extra":5},[],[],{"id":7,"slug":8,"term":9,"definition":10,"related_product_ids":11,"related_resource_ids":12,"meta_description":13,"term_i18n":14,"definition_i18n":18,"status":22,"created_at":23,"updated_at":24,"meta_description_i18n":25,"brand":29,"relatedProducts":30,"relatedResources":31,"relatedArticles":32},"34fc33fa-18cb-4c84-885e-f00aeaa03fae","ligation-chimique-native","Ligation chimique native (NCL)","La \u003Cstrong>ligation chimique native\u003C/strong> (\u003Cem>Native Chemical Ligation\u003C/em>, NCL) est une méthode de \u003Cem>chimie de peptides fondamentale\u003C/em> introduite par Philip Dawson et Stephen Kent en 1994 (Science 266:776), permettant d'assembler deux fragments peptidiques en une unique liaison peptidique \u003Cem>native\u003C/em> (non modifiée) via une réaction chimiosélective en conditions aqueuses douces. Cette innovation a révolutionné la synthèse de protéines chimiques >50 résidus, jusqu'alors limitées par la SPPS directe (rendement chutant exponentiellement au-delà de 50 aa).\n\n\u003Cstrong>Principe chimique\u003C/strong>. La NCL repose sur la réaction entre un \u003Cem>peptide C-terminal thioester\u003C/em> (—COSR, préparé par SPPS avec résine Dawson/MeDbz/sulfonamide) et un \u003Cem>peptide N-terminal cystéine\u003C/em> (—H2N-Cys-peptide). Le thiol de la Cys attaque le carbonyle du thioester formant un intermédiaire \u003Cem>thioester transitoire\u003C/em>, qui subit un \u003Cem>réarrangement S→N intramoléculaire\u003C/em> (5-exo-trig) via la cyclisation du thiolate sur l'amine libre de la Cys, produisant une liaison peptidique native Cys en position de jonction. La réaction est réalisée en tampon aqueux pH 6.5-7.5 avec MPAA (4-mercaptophenylacetic acid) comme thiol catalytique, TCEP comme réducteur, guanidine 6M comme dénaturant pour peptides insolubles.\n\n\u003Cstrong>Extensions et variantes\u003C/strong>. L'exigence de Cys à la jonction est contournée par diverses extensions : \u003Cem>desulfurisation\u003C/em> post-NCL (Cys → Ala, Yan & Dawson 2001), ligation extended avec sélénocystéine (Sec, Hondal 2001), alanine/valine/leucine/proline \u003Cem>thiol-surrogates\u003C/em> (β-thiol-Ala, γ-thiol-Val, Payne & Chen), \u003Cem>expressed protein ligation\u003C/em> (EPL, Muir 1998, thioester biologique via intein), \u003Cem>Staudinger ligation traceless\u003C/em> (Raines 2000) ou ligation KAHA (Bode).\n\n\u003Cstrong>Applications majeures\u003C/strong>. La NCL et ses extensions ont permis la synthèse chimique d'\u003Cem>insuline, ribonucléase A, histones, ubiquitine, β-amyloïde, HIV protéase, transthyrétine\u003C/em> et d'autres protéines jusqu'à ~300 aa. Elle permet l'incorporation site-spécifique de \u003Cem>modifications post-traductionnelles\u003C/em> (phosphorylation, glycosylation, acétylation, méthylation, ubiquitination), d'acides aminés non-naturels, d'étiquettes fluorescentes et d'analogues isotopiques — impossible par expression recombinante ou SPPS linéaire classique.",[],[],"Ligation chimique native (NCL) : méthode Dawson-Kent 1994 pour assembler deux peptides en liaison peptidique native via thioester+Cys.",{"de":15,"en":16,"es":17},"Native chemische Ligation (NCL)","Native Chemical Ligation (NCL)","Ligación química nativa (NCL)",{"de":19,"en":20,"es":21},"Die \u003Cstrong>native chemische Ligation\u003C/strong> (NCL) ist eine \u003Cem>grundlegende Methode der Peptidchemie\u003C/em>, die 1994 von Philip Dawson und Stephen Kent eingeführt wurde (Science 266:776). Sie ermöglicht die Verknüpfung zweier Peptidfragmente über eine einzige \u003Cem>native\u003C/em> (unmodifizierte) Peptidbindung durch eine chemoselektive Reaktion unter milden wässrigen Bedingungen. Diese Innovation revolutionierte die chemische Synthese von Proteinen mit >50 Resten, die zuvor durch die direkte SPPS begrenzt war (exponentiell sinkende Ausbeute jenseits von 50 aa).\n\n\u003Cstrong>Chemisches Prinzip\u003C/strong>. Die NCL beruht auf der Reaktion zwischen einem \u003Cem>Peptid mit C-terminalem Thioester\u003C/em> (—COSR, hergestellt durch SPPS mit Dawson-/MeDbz-/Sulfonamid-Harz) und einem \u003Cem>Peptid mit N-terminalem Cystein\u003C/em> (—H2N-Cys-Peptid). Das Thiol des Cys greift den Carbonylkohlenstoff des Thioesters an und bildet ein transientes \u003Cem>Thioester-Intermediat\u003C/em>, das eine \u003Cem>intramolekulare S→N-Umlagerung\u003C/em> (5-exo-trig) durch Zyklisierung über das freie Amin des Cys durchläuft und so eine native Peptidbindung mit Cys an der Verknüpfungsstelle erzeugt. Die Reaktion wird in wässrigem Puffer bei pH 6.5-7.5 mit MPAA (4-Mercaptophenylessigsäure) als katalytischem Thiol, TCEP als Reduktionsmittel und 6M Guanidin als Denaturierungsmittel für unlösliche Peptide durchgeführt.\n\n\u003Cstrong>Erweiterungen und Varianten\u003C/strong>. Die Notwendigkeit eines Cys an der Verknüpfungsstelle wird durch verschiedene Erweiterungen umgangen: \u003Cem>Desulfurierung\u003C/em> nach der NCL (Cys → Ala, Yan & Dawson 2001), erweiterte Ligation mit Selenocystein (Sec, Hondal 2001), \u003Cem>Thiol-Surrogate\u003C/em> für Alanin/Valin/Leucin/Prolin (β-Thiol-Ala, γ-Thiol-Val, Payne & Chen), \u003Cem>Expressed Protein Ligation\u003C/em> (EPL, Muir 1998, biologischer Thioester über Intein), \u003Cem>spurlose Staudinger-Ligation\u003C/em> (Raines 2000) oder KAHA-Ligation (Bode).\n\n\u003Cstrong>Wichtige Anwendungen\u003C/strong>. Die NCL und ihre Erweiterungen haben die chemische Synthese von \u003Cem>Insulin, Ribonuklease A, Histonen, Ubiquitin, β-Amyloid, HIV-Protease, Transthyretin\u003C/em> und weiteren Proteinen bis ~300 aa ermöglicht. Sie erlaubt den ortsspezifischen Einbau von \u003Cem>posttranslationalen Modifikationen\u003C/em> (Phosphorylierung, Glykosylierung, Acetylierung, Methylierung, Ubiquitinierung), nicht natürlichen Aminosäuren, Fluoreszenzmarkern und Isotopenanaloga — was durch rekombinante Expression oder klassische lineare SPPS unmöglich ist.","\u003Cstrong>Native chemical ligation\u003C/strong> (NCL) is a \u003Cem>fundamental peptide chemistry method\u003C/em> introduced by Philip Dawson and Stephen Kent in 1994 (Science 266:776), allowing assembly of two peptide fragments into a single \u003Cem>native\u003C/em> (unmodified) peptide bond via chemoselective reaction under mild aqueous conditions. This innovation revolutionised chemical synthesis of >50-residue proteins, previously limited by direct SPPS (yield dropping exponentially beyond 50 aa).\n\n\u003Cstrong>Chemical principle\u003C/strong>. NCL relies on the reaction between a \u003Cem>C-terminal thioester peptide\u003C/em> (—COSR, prepared by SPPS with Dawson/MeDbz/sulfonamide resin) and an \u003Cem>N-terminal cysteine peptide\u003C/em> (—H2N-Cys-peptide). The Cys thiol attacks the thioester carbonyl forming a transient \u003Cem>thioester intermediate\u003C/em>, which undergoes \u003Cem>intramolecular S→N rearrangement\u003C/em> (5-exo-trig) via thiolate cyclisation on the Cys free amine, producing a native peptide bond with Cys at the junction. The reaction is performed in aqueous buffer pH 6.5-7.5 with MPAA (4-mercaptophenylacetic acid) as catalytic thiol, TCEP as reducer, 6M guanidine as denaturant for insoluble peptides.\n\n\u003Cstrong>Extensions and variants\u003C/strong>. The Cys requirement at the junction is bypassed by various extensions: post-NCL \u003Cem>desulfurisation\u003C/em> (Cys → Ala, Yan & Dawson 2001), extended ligation with selenocysteine (Sec, Hondal 2001), alanine/valine/leucine/proline \u003Cem>thiol-surrogates\u003C/em> (β-thiol-Ala, γ-thiol-Val, Payne & Chen), \u003Cem>expressed protein ligation\u003C/em> (EPL, Muir 1998, biological thioester via intein), \u003Cem>traceless Staudinger ligation\u003C/em> (Raines 2000) or KAHA ligation (Bode).\n\n\u003Cstrong>Major applications\u003C/strong>. NCL and its extensions have enabled chemical synthesis of \u003Cem>insulin, ribonuclease A, histones, ubiquitin, β-amyloid, HIV protease, transthyretin\u003C/em> and other proteins up to ~300 aa. It allows site-specific incorporation of \u003Cem>post-translational modifications\u003C/em> (phosphorylation, glycosylation, acetylation, methylation, ubiquitination), non-natural amino acids, fluorescent tags and isotopic analogues — impossible by recombinant expression or classical linear SPPS.","La \u003Cstrong>ligación química nativa\u003C/strong> (NCL) es un \u003Cem>método fundamental de la química de péptidos\u003C/em> introducido por Philip Dawson y Stephen Kent en 1994 (Science 266:776), que permite ensamblar dos fragmentos peptídicos en un único enlace peptídico \u003Cem>nativo\u003C/em> (sin modificar) mediante una reacción quimioselectiva en condiciones acuosas suaves. Esta innovación revolucionó la síntesis química de proteínas de >50 residuos, hasta entonces limitada por la SPPS directa (rendimiento que cae exponencialmente más allá de los 50 aa).\n\n\u003Cstrong>Principio químico\u003C/strong>. La NCL se basa en la reacción entre un \u003Cem>péptido tioéster C-terminal\u003C/em> (—COSR, preparado por SPPS con resina Dawson/MeDbz/sulfonamida) y un \u003Cem>péptido con cisteína N-terminal\u003C/em> (—H2N-Cys-péptido). El tiol de la Cys ataca el carbonilo del tioéster formando un \u003Cem>intermedio tioéster\u003C/em> transitorio, que sufre un \u003Cem>reordenamiento intramolecular S→N\u003C/em> (5-exo-trig) mediante ciclación del tiolato sobre la amina libre de la Cys, produciendo un enlace peptídico nativo con la Cys en la unión. La reacción se realiza en tampón acuoso a pH 6.5-7.5 con MPAA (ácido 4-mercaptofenilacético) como tiol catalítico, TCEP como reductor, guanidina 6M como desnaturalizante para péptidos poco solubles.\n\n\u003Cstrong>Extensiones y variantes\u003C/strong>. El requisito de Cys en la unión se elude mediante diversas extensiones: \u003Cem>desulfuración\u003C/em> post-NCL (Cys → Ala, Yan y Dawson 2001), ligación extendida con selenocisteína (Sec, Hondal 2001), \u003Cem>sustitutos de tiol\u003C/em> de alanina/valina/leucina/prolina (β-tiol-Ala, γ-tiol-Val, Payne y Chen), \u003Cem>ligación de proteínas expresadas\u003C/em> (EPL, Muir 1998, tioéster biológico vía inteína), \u003Cem>ligación de Staudinger sin trazas\u003C/em> (Raines 2000) o ligación KAHA (Bode).\n\n\u003Cstrong>Aplicaciones principales\u003C/strong>. La NCL y sus extensiones han permitido la síntesis química de \u003Cem>insulina, ribonucleasa A, histonas, ubiquitina, β-amiloide, proteasa del VIH, transtiretina\u003C/em> y otras proteínas de hasta ~300 aa. Permite la incorporación específica de sitio de \u003Cem>modificaciones postraduccionales\u003C/em> (fosforilación, glicosilación, acetilación, metilación, ubiquitinación), aminoácidos no naturales, marcadores fluorescentes y análogos isotópicos, algo imposible mediante expresión recombinante o SPPS lineal clásica.","published","2026-04-23T16:14:10.497287+00:00","2026-09-25T10:28:20.541324+00:00",{"de":26,"en":27,"es":28},"Native chemische Ligation (NCL): Methode von Dawson-Kent 1994, die zwei Peptide über eine native Peptidbindung (Thioester+Cys) verknüpft.","Native Chemical Ligation (NCL): Dawson-Kent 1994 method to assemble two peptides via native peptide bond through thioester+Cys.","Ligación química nativa (NCL): método de Dawson-Kent (1994) para ensamblar dos péptidos en un enlace peptídico nativo vía tioéster+Cys.","lab",[],[],[33],{"id":34,"slug":35,"title":36,"excerpt":37,"image":38,"published_at":39,"topic":40},"328d4743-2063-4b90-836c-c93f5befd5fa","synthese-peptidique-spps-fmoc-boc-merrifield-guide-complet-recherche","Synthèse peptidique en phase solide (SPPS) : guide complet Merrifield, Fmoc, Boc, résines, agents de couplage et contrôle qualité","Principe Merrifield, stratégies Fmoc et Boc, résines (Wang, Rink amide, 2-chlorotrityl), agents de couplage (HBTU, HATU, DIC/HOBt), cycle de synthèse, clivage TFA, purification RP-HPLC, contrôle qualité LC-MS et test Kaiser. Le pilier scientifique de référence sur la fabrication des peptides synthétiques.","https://dwomsbawthlktapmtmqu.supabase.co/storage/v1/object/public/news-images/news/synthese-peptidique-spps-fmoc-boc-merrifield-guide-complet-recherche/couverture-v1.webp","2026-04-23T17:05:29.620602+00:00",{"id":41,"slug":42,"brand":29,"image":43,"label":44,"created_at":45,"label_i18n":46,"description":48,"description_i18n":49},"76bb3e2d-d0c7-41aa-a59c-32f4c77379e9","recherche","https://dwomsbawthlktapmtmqu.supabase.co/storage/v1/object/public/topic-images/topics/rubrique-recherche/vignette-v1.webp","Recherche & Innovation","2025-12-09T19:04:45.271481+00:00",{"en":47},"Research & Innovation","Les dernières avancées sur les peptides.",{"en":50},"The latest advances in peptides."]